Pureza por HPLC: qué significa el porcentaje de un COA
El número que más se mira en un certificado de análisis (COA) es el porcentaje de pureza. Casi siempre proviene de una prueba llamada HPLC, o cromatografía líquida de alta resolución. Esta guía explica qué mide esa prueba y qué no.
Qué hace el HPLC
El laboratorio disuelve una pequeña cantidad de la muestra y la hace pasar a presión por una columna rellena de un material que retiene a cada molécula con distinta fuerza. Las moléculas salen de la columna en momentos diferentes y un detector de luz ultravioleta registra cada salida como un pico. El gráfico resultante se llama cromatograma.
Cómo se obtiene el porcentaje
Cada pico tiene un área. La pureza se calcula dividiendo el área del pico principal, el del compuesto esperado, entre la suma de las áreas de todos los picos. Si el pico principal representa 99.1% del área total, el COA reporta 99.1% de pureza.
Qué revisar en el cromatograma
- Un pico dominante. Un lote limpio muestra un pico alto y estrecho, con picos secundarios muy pequeños.
- El tiempo de retención. Es el minuto en el que sale el pico principal. Debe ser consistente entre lotes del mismo compuesto analizados con el mismo método.
- La tabla de picos. Lista cada pico con su área y su porcentaje. La suma debe dar 100%.
- El método. Columna, fase móvil y longitud de onda del detector. Sin esos datos el resultado no se puede reproducir.
Lo que el HPLC no dice
La pureza por HPLC indica qué proporción de la muestra es el compuesto principal, pero no confirma por sí sola cuál es ese compuesto ni cuánto hay en el vial. La identidad se confirma con espectrometría de masas y la cantidad con una prueba de contenido. Por eso un COA completo incluye varios paneles, no solo uno.
Pureza y cantidad no son lo mismo
Un vial puede tener 99% de pureza y aun así contener menos material del indicado en la etiqueta. Revisa que el COA reporte también el contenido medido del lote.
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